据优宁维（301166）抗体专家消息，高纯度、高得率的磁珠分选结果，高度依赖于前期的样本制备质量。样本制备作为分选的“源头地基”，其全流程操作细节直接影响后续分选效能。本文系统梳理了从样本保存到单细胞悬液制备的关键步骤与优化方案，旨在从源头攻克实验痛点。

一、样本保存：维持细胞活性是基础

样本获取后若无法及时处理，需进行特殊保存以维持细胞状态，避免活率下降影响分选。

1. 组织样本：建议使用商品化组织保存液（如MACS Tissue Storage Solution），将组织完全浸没于4℃保存，可保持活性至少48小时。操作时需根据组织块大小选择合适离心管，确保充分接触且避免浪费，组织无需预先剪切。

2. 血液样本：需使用含特定抗凝剂（如肝素钠）的抗凝管保存，可维持细胞活性与免疫特性稳定至少24小时。收集后应立即轻柔颠倒混匀，避免剧烈震荡导致溶血。样本应在室温直立保存运输，并及时检测质量，防止降解或污染。

二、制备高质量单细胞悬液：平衡解离与细胞保留

单细胞悬液质量是分选成败关键，需在避免过度解离与最大化保留细胞数量间取得平衡。针对不同样本，推荐以下解离方案：

1. 实体组织样本：

* 机械法：适用于质地较软或纤维含量少的组织。操作需在冰浴或4℃进行，使用预冷缓冲液，研磨应轻柔，并根据细胞大小选择合适孔径的细胞筛网过滤。

* 酶解法：适用于纤维含量高或质地坚韧的组织（如肿瘤、肝脏）。需根据组织类型选择合适酶解方案（如胶原酶I-V型、胰蛋白酶等），酶液需37℃复温，解离时每10分钟轻柔摇晃助分散。

* GentleMACS组织解离系统：该系统融合机械与酶解原理，实现自动化、标准化解离，能获得高活性、抗原表位保护好的细胞悬液。操作时需使用配套耗材（C管或M管），并根据组织软硬程度选择对应研磨程序。对于罕见组织或无专属程序的情况，可咨询技术支持或使用通用型多组织解离试剂盒（如Multi Tissue Dissociation Kit 1/2）进行优化。

2. 血液样本：

* 裂红法：特异性裂解红细胞以富集白细胞。溶血素需4℃保存现用现配，裂红体积为全血3-5倍，时间3-5分钟，避免过长或过短。

* 密度梯度离心法：利用细胞密度差异分离目标细胞。需根据样本来源及目标细胞类型选择合适密度的Ficoll分离液（如人外周血用1.077 g/mL，小鼠用1.084 g/mL），使用前恢复至室温（18-20℃），并在相同温度下离心，过程需缓升缓降。

三、悬液质量优化与评估

获得的单细胞悬液可能含有团块、碎片或死细胞，需进行优化处理。若后续进行磁珠分选或测序，需进行裂红和细胞碎片去除。

优化后必须评估细胞活性，确保活率＞85%。评估方法包括：

1. 血球计数板：计数时遵循“计上不计下、计左不计右”原则，并按公式计算浓度与活率。

2. 细胞计数仪：按比例将悬液与台盼蓝染液混合后上机，读取浓度、活率等数据。

注意：若目的细胞比例过高（≥90%），应重新评估分选必要性，或考虑阴性去除方案。